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細胞凍存液的配方介紹

更新時間:2025-05-30  |  點擊次數:191
細胞凍存液是用于細胞冷凍保存的液體,它能夠保護細胞在低溫下不受損傷,尤其是在細胞凍結和解凍過程中。凍存液通常包含保護劑、緩沖液以及其他有助于維持細胞存活的成分。以下是常用的細胞凍存液配方及其成分:  
1.常見配方  
配方1:基礎凍存液  
DMSO(二甲基亞硫酰胺):10%  
FBS(胎牛血清):90%  
這種配方是簡單的凍存液,DMSO作為常用的細胞保護劑,可以有效防止細胞在凍結時形成冰晶,FBS提供了額外的保護和營養成分。  
配方2:改進凍存液(適用于敏感細胞)  
DMSO:5-10%  
FBS:50-80%  
PBS(磷酸鹽緩沖液):10-20%  
這種配方的凍存液減少了DMSO的濃度,適合對于DMSO較敏感的細胞,FBS的比例保持較高。  
配方3:高濃度DMSO凍存液  
DMSO:20%  
FBS:70%  
PBS:10%  
這種配方適合對DMSO耐受性較好的細胞,能夠提供更強的保護。  
2.凍存液的組成和作用  
二甲基亞硫酰胺(DMSO):作為細胞凍存液的主要保護劑,DMSO可以防止細胞內水分在低溫下結冰,減少冰晶對細胞結構的破壞。它的濃度通常在5%-20%之間。  
胎牛血清(FBS):FBS中含有蛋白質、脂肪、維生素、礦物質等,能夠為細胞提供營養,增強凍存過程中的細胞生存率。  
PBS:用于維持凍存液的pH值和滲透壓,確保細胞能夠在低溫環境下存活而不受損。  
3.凍存步驟  
制備凍存液:根據所用細胞的特點選擇合適的凍存液配方。  
離心與重懸:將細胞進行離心,然后將其重懸在凍存液中,確保細胞濃度適宜(通常為1-10×10^6個細胞/mL)。  
分裝:將細胞凍存液分裝到凍存管中,確保每個凍存管中細胞量適當。  
緩慢冷凍:使用程序降溫設備將細胞緩慢降溫至-80°C,一般每分鐘降溫1°C至-80°C,再轉移至液氮保存。  
存儲:將凍存管放入液氮中進行長期保存。  
4.注意事項  
DMSO濃度:DMSO濃度過高可能對細胞造成毒害,因此應根據細胞類型選擇合適的濃度。  
緩慢冷凍:緩慢的冷凍過程能夠使水分緩慢結晶,減少對細胞的傷害。程序降溫儀器通常有內建的逐步降溫程序。  
解凍過程:解凍時要迅速進行,避免細胞長時間暴露在高濃度的DMSO中,從而降低其存活率。  
通過適當的凍存液配方和冷凍過程,可以顯著提高細胞在凍存過程中的存活率,并確保它們在解凍后能夠恢復正常功能。
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